软下疳的初疮需与硬下疳鉴别；软下疳的横痃也需与梅毒横痃及第四性病相鉴别。首先需除外梅毒，做暗视野显微镜检查，至少苍白螺旋体3次阴性，梅毒血清均阴性；除外腹股沟肉芽肿，涂片做姬姆萨染色查不到多诺万小体。可参见梅毒部分的有关内容。