关键词：流式细胞仪（FCM） CD4+、CD8+细胞 HIV/AIDS临床进展

　　我国自1985年发现第一例艾滋病以来，HIV流行状况日益加重，近年来呈加速上升趋势，按卫生部公布的数字截止2000年底HIV感染总数为22517例，其中艾滋病人880例，但实际估计感染数为60万，这对用何种指标来监测HIV感染者的临床过程及病人的免疫状况和愈后判断提出了更迫切的要求。

　　T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一群细胞，在正常机体内各淋巴细胞亚群相互作用，维持着机体正常免疫功能，当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，可导致机体免疫功能紊乱并发生一系列病理变化。 HIV主要侵犯人CD4+淋巴细胞，导致其数量上的减少和功能缺陷，使机体免疫平衡被打破造成免疫功能低下，最终导致各种机会感染和肿瘤。因此，对淋巴细胞亚群，特别是CD4+淋巴细胞的检测在评价HIV/AIDS 免疫状况、疾病进展及预后判断等方面都有重要作用。为此，我们用流式细胞仪对83例HIV/AIDS患者的外周血进行了淋巴细胞亚群检测并结合临床情况对其免疫状况进行了评价，以探讨这些指标对疾病临床分期的意义，现将研究结果报告如下。

　　材料和方法

　　1.1 研究对象： 1999-2001年7月在我院就诊的HIV-1感染者和就医的AIDS 病人所有样品均经免疫印迹实验确认。临床分组参照中华人民共和国国家标准[GB16000-1995]，由临床医生进行临床分期诊断，按诊断将感染者分为三组，即无症状组（AS组）、有相关症状组(ARC组)、艾滋病组(AIDS组)。其中ARC组为临床表现HIV感染相关症但不足以认定发病的感染人群。三组的人数分别是无症状组38名,有HIV相关症状者24名，AIDS病人21名。

　　1.2主要试剂及仪器：　
　　1.2. 1主要试剂: MultiTEST四色试剂：CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC　FACS溶血素(10X)：试验前用蒸馏水按1：10的比例配制1X应用液（以上试剂购自美国晶美公司）

　　1.2.2 主要仪器: FACSCalibur(美国BD公司)

　　1.3 研究方法:
　　1.3.1 标本制备：所有研究对象采集外周静脉血2-3ml,EDTA-K3抗凝。标本与试剂 用前轻轻摇匀。

　　1.3.2 TruCOUNT绝对计数管中准确加入20ul MultiTEST四色试剂和50ul全血，充分混匀。

　　1.3.3室温阴暗处反应15分钟。

　　1.3.4加入450ul FACS溶血液 (1X)，充分混匀。

　　1.3.5向另外三个TruCOUNT绝对计数管中中分别加入50ul TruCOUNT Control Beads (low/medium/high) 作为绝对计数质控。
1.3.6运行MultiSET程序上机检测。

　　结 果

　　2.1 HIV无症状感染者、HIV有症状感染者、AIDS病人与正常人之间各项指标比较从表1表2可见, HIV无症状感染者、HIV有症状感染者、AIDS病人中, CD4+细胞绝对数和占淋巴细胞亚群百分率都明显低于正常人群(P<0.001),且AIDS病人与HIV无症状感染者、HIV有症状感染者之间也有显著性差异(P<0.001)。CD4+/CD8+的比值下降也非常明显，与正常人相比几组P值都达到了P=E-7的水平，而CD45+、CD3+细胞在ARC组、AS组与N组之间无显著性差异只是在AIDS组与N组和ARC组之间有显著性差异CD8+细胞也只是在AS组与N组、AIDS组与ARC组之间有显著性差异，而CD3+、CD8+细胞百分率各组间没有显著性差异（除在N组与AS组之间有差异外）。

　　表1 四组淋巴细胞亚群数量比较

　　注:黑体表示此组与N组比较P<0.001,斜体表示此组与AS组比较P<0.001,下划线表示此组与ARC组比较P<0.001。

　　注:黑体表示此组与N组比较P<0.01,斜体表示此组与AS组比较P<0.01。

　　2.2 HIV无症状感染者、HIV有症状感染者、AIDS病人与感染时间的关系
　　如图1所示,随感染时间的延长HIV感染者从无症到有症状感染者最后进展成为AIDS病人，由于多数HIV感染者不知道自己的准确感染时间，图中时间多为检测抗体阳性时间。经统计学处理三组中HIV无症状感染组与HIV有症状感染组之间无显著性差异(P>0.05)、AIDS病人与HIV有症状感染组之间有显著性差异(P<0.01)。结合表1进行统计分析可以知道感染者的CD4+细胞数,CD4+/CD8+比值随感染时间延长而逐渐降低,并且在不同感染时间之间的差异有高度显著性(P<0.01)。并与病程呈明显负相关(r=-0.414,n=83,P<0.01)。

图1 临床分组与感染时间的关系

　　讨论
　　T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一群细胞，其主要有CD4+和CD8+二群细胞组成,在正常机体内各这两群胞亚群相互作用，保持一定平衡从而维持着机体正常免疫功能。当HIV感染机体时，CD4+细胞是HIV攻击的主要靶细胞,随着病程进展而进行性被破坏减少，同时导致CD4+/CD8+比值下降，破坏了免疫平衡，结果导致各种机会感染和肿瘤。因此，CD4+淋巴细胞被公认为是HIV感染后评判其疾病进展的最好指标，我们的实验数据表明，外周血中CD4+细胞数与疾病进程明显相关，支持这一结论。同时，我们的实验结果还证明CD4+/CD8+比值也是一很好的指标。其它指标如CD45+、CD3+、CD8+及上述各群细胞的相对数则意义不大。

　　随着流式细胞仪技术方法上的不断改进，各种更方便更快速更准确的试剂盒也发展起来，本研究就是用MultiTEST四色试剂盒：CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC用MultiSET全自动获取分析软件完成的。与其他测定淋巴细胞亚群的方法相比它具有准确、方便、快速等优点，无需手工计数白细胞且使用免洗试剂制备标本，同时使用TruCOUNT进行绝对计数。因此，使用MultiSET软件，可以提高实验室的工作效率和计数的精确度。但在操作过程中应注意：使用精密加样器，使用反向加样法准确加取50ul标本。同时由于TruCOUNT管批号不同，beads含量不同，因此，更换批号时注意更改MultiSET中的 Lot Id和beads count。不同批号的TruCOUNT管不能混用。

摘自《临床输血与检验》2002,4(1):9-11